截性克隆病治疗

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你可能提过很多质粒却不一定知道这些 [复制链接]

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经常提质粒吗?

熟练之后,提质粒乃至质粒构建都很简单。

但如果真问起一些质粒的细节,可能很多人回答不了。

不信随我看看。

质粒基本组成要素

复制起始位点Ori即控制复制起始的位点

抗生素抗性基因——如常见的Amp+、Kan+,可便于加以检测或者筛选

多克隆位点MCS——用于克隆携带外源基因片段

P/E——启动子/增强子

Terms——终止信号

poly(A)信号——可起到稳定mRNA作用

如何阅读质粒图谱

第一步:首先看Ori的类型,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)

第二步:再看筛选标记,如抗性,决定使用什么筛选标记

Ampr水解β-内酰胺环,解除氨苄的*性;

tetr可以阻止四环素进入细胞;

camr生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去*性;

neor(kanr)氨基糖苷磷酸转移酶使G(卡那霉素衍生物)失活;

hygr使潮霉素β失活。

第三步:看多克隆位点(MCS)

它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。(如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活。)

第四步:是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。

不同的启动子适用于不同的宿主,选择载体主要依据启动子类型判断是否适用于目的工具宿主。

如何选择载体

选择载体主要依据构建的目的,同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。

如果构建的目的是要在指定宿主中表达一个特定的基因,则要选择与宿主相匹配的表达载体。如要做基因的原核表达,则需要选择原核表达载体。

需要

细胞、载体、病*包装

等各项实验服务

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