Rab9兔单克隆抗体 [复制链接]

来源：ChemicalBook

背景[1-7]

Rab9RabbitMonoclonalAntibody(Rab9兔单克隆抗体)是Rab9作为抗原对兔进行免疫后筛选出只产生的Rab9抗体的B淋巴细胞，再将B细胞通过细胞融合技术与骨髓瘤杂交然后筛选出只分泌Rab9抗体的杂交瘤细胞，最后通过层析柱纯化制的高纯度的Rab9抗体兔单克隆抗体。Rab蛋白是单体GTP酶Ras超家族中最大的亚家族，定位在胞内复合物膜表面。Rab蛋白家族作为分子开关控制囊泡转运，对生物合成、内吞、分泌、细胞分化和细胞生长至关重要。

Rab蛋白功能障碍将会导致免疫缺陷、癌症和神经系统疾病等疾病。Rab9主要定位在晚期胞内体，调节甘露糖-6-磷酸受体(M6PRs)从晚期胞内体到高尔基网的反向回收转运。在果蝇中利用ends-out同源重组基因打靶的方法敲除Rab9基因。发现Rab9基因敲除的果蝇纯合突变体致死，致死期在三龄幼虫时期。

部分Rab9敲除果蝇有黑色素瘤表型并伴随着Toll信号通路的激活，Rab9缺失可以激活果蝇天然免疫反应。Rab9缺失可以影响果蝇神经突触生长，rab9纯合突变体果蝇三龄幼虫神经肌肉接头过度生长以及果蝇神经突触pMAd染色水平升高。另外，Vps35是retromer复合物中组件，发现rab9突变体表型和vps35突变体有表型一致的地方，Rab9与Retromer缺失都会引起果蝇免疫反应的激活，影响果蝇生长神经生长。

Rab9是Rab家族成员之一，调节从晚期内体到高尔基网的囊泡转运。细胞内脂质沉积是C型尼曼-皮克病的一个重要特征，TLRs是一类重要的模式识别受体，天然免疫细胞通过识别病原微生物中保守的病原体相关分子模式，产生细胞因子和趋化因子，启动天然免疫应答，从而构成了机体免疫反应的第一道防线。然而，TLRs的活化异常或者过分活化，可能使自身免疫疾病恶化，产生如系统性红斑狼疮、内*素休克和自身免疫等疾病。因此，TLRs信号通路的活化必须得到严密控制。

应用[8][9]

Rab9兔单克隆抗体可用于Rab9信号通路研究：

用分子生物学技术构建pCDH1-MCF1-RAB9-EF1-copGFP表达质粒，然后用脂质体介导法将慢病*包装系统的pPACKH1-GAG、pPACKH1-REV、pVSV-G和携带目的基因的载体pCDH1-MCF1-RAB9-EF1-copGFP共同转染到T包装细胞内包装病*，采用包装成功的病*感染小胶质细胞（BV-2），72小时后，观察目的基因（GFP为报告基因）的表达。同时，将包装好的病*注入BalB／c鼠小脑，4周后采用Western-blot检测Lenti-Rab9的表达水平。

结果凝胶电泳和DNA测序证明Rab9cDNA成功导入慢病*载体pCDH1-MCF1-EF1-copGFP，感染小胶质细胞（BV-2）72小时后，BV-2细胞中可见EGFP的表达。将包装产生的病*注入BalB／c鼠小脑，4周后Western-blot分析显示：BalB／c鼠小脑Rab9表达明显升高，证明编码Rab9cDNA的慢病*包装成功，该病*能明显增加Rab9的表达量。结论结果表明携带Rab9cDNA的重组慢病*包装获得成功。

该病*能明显增加Rab9的表达，它可能成为一种新的治疗神经系统变性病的手段。携带Rab9cDNA的重组慢病*对C型尼曼-皮克病小鼠神经病理的影响目的观察npc-／-小鼠生后三天内经双侧侧脑室注射携带Rab9cDNA的Lentivirus对C型尼曼-皮克病（NPC）小鼠神经病理的影响。

方法①经双侧侧脑室途径给生后三天内的npc-／-小鼠注射携带Rab9cDNA的Lentivirus。②通过HE染色、免疫组织化学及免疫印迹方法评估病*注射后的npc-／-小鼠的神经病理变化。结果①携带Rab9cDNA的Lentivirus能广泛感染npc-／-小鼠，介导Rab9在脑中表达。②携带Rab9cDNA的Lentivirus明显延缓浦肯野细胞的脱失、减少npc-／-小鼠轴突球状体的数量。③携带Rab9cDNA的Lentivirus使磷酸化的神经丝蛋白（由SMI31识别）、磷酸化的Tau蛋白（由CP-13识别）和有丝分裂相关蛋白（由MPM-2识别）明显降低，总Tau蛋白（由TG-5识别）没有变化。

结论双侧侧脑室注射携带Rab9cDNA的Lentivirus能减轻npc-／-小鼠的神经元细胞骨架病变，对npc-／-小鼠有保护作用，Rab9有可能成为值得开发的治疗NPC的新靶标。#单克隆抗体#

参考文献

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[8]Cyclin-dependentKinase5inLewyBody-likeInclusionsinAnteriorHornCellsofaPatientwithSporadicAmyotrophicLateralSclerosis[J].S.Nakamura,Y.Kawamoto,S.Nakano,A.Ikemoto,I.Akiguchi,J.Kimura.Neurology.(1)

[9]郝又国.携带Rab9cDNA的慢病*对C型Niemann-Pick病小鼠的神经保护作用[D].华中科技大学，.